常用的有薄层色谱法、纸色谱法、高效液相色谱法和气相色谱法等。
(一)薄层色谱
1.吸附薄层色谱法
(1)吸附剂:硅胶、氧化铝。硅胶:酸性、需处理。氧化铝可直接分离。
(2)展开剂:亲脂性溶剂,一般氯仿为基本溶剂,根据Rf 值适当调整
(3)显色: 可见、紫外、显色剂。
2.分配薄层色谱法
(1)支持剂:通常选用硅胶或纤维素粉作支持剂
(2)固定相和展开剂:
脂溶性生物碱:固定相:甲酰胺;展开剂:亲脂性有机溶剂;水溶性生物碱或盐:固定相:水;展开剂:亲水性溶剂。
应用范围较广,既可以分离弱极性或中等极性生物碱(甲酰胺为固定相),也可以分离水溶性的生物碱(水为固定相)。
(二)纸色谱:
正相分配色谱,其色谱条件亦类似于薄层正相分配色谱、
1.固定相:水、甲酰胺或酸性水溶液
2.展开剂:以水作固定相的纸色谱,宜用亲水性溶剂系统作展开剂。
以甲酰胺和酸性缓冲液作固定相的纸色谱,多以苯、氯仿、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂为主组成的溶剂系统作展开剂。
3.显色剂:与薄层色谱法基本相同,但不宜使用含硫酸的显色剂。
常用于水溶性生物碱、生物碱盐和亲脂性生物碱的分离检识。
(三)高效液相色谱
高效液相色谱法广泛应用于生物碱的分离检识。特别是对结构十分相似的生物碱,能够通过高效液相色谱法获得满意的分离效果。
生物碱的高效液相分析可采用分配色谱法、吸附色谱法、离子交换色谱法等。其中以分配色谱法中的反相色谱法应用较多。